2 用移液管緊貼瓶壁緩慢地將液體加 到五層細胞培養瓶中,避免產生泡 沫或者氣泡(每次加液時移液管內 液體可留少許)。 注意事項:10ml 移液管可以伸到 培養瓶        底部使培養基分散開,而 25 ml 移液管則只能伸到 NEST 標志的地方把液體分散開。

3 把培養瓶有 NEST 標志那一側朝 向自己,順時針傾斜 45 度左右放 置一段時間,使瓶中各個隔層的液 體達到平衡。 

4 輕緩地將培養瓶水平放置于工作臺 上,有耐思標志那一面朝上。

5 前后左右輕輕晃動多層瓶,液體會 均勻地分布在五個生長面上。 注意事項:搖晃的動作要輕柔,一 方面是防止起泡沫,另一方面是要 防止培養基滲漏到下層中。

6 保持跟步驟 3 中一樣的姿勢將多層 瓶轉移至培養箱,重復步驟 4 將多 層瓶放好。 

7 抽吸法: 1抽吸的時候,將多層瓶傾斜 45 度,有 NEST 標記的一面朝向自 己。2 將移液管伸到底部抽吸培 養基,直至完全抽吸完。

8 傾倒法: 將有 NEST 標志的一面朝向自己, 逆時針 45 度傾倒液體。 注意事項:抽吸培養液時需使用 10 ml 或者 2 ml 移液管,才能將 培養液吸盡。 ??????????????????????????????細胞的收集:

9 用緩沖液清洗一遍以去除殘留的血清,后加入消化液(≥ 5ml/ 層),混勻。

10 消化大約 2 min(視細胞情況而定),用消化終止液中 和消化液。

11 采用移液管抽吸法或傾倒法將細胞懸液置于離心管等容 器中。

12 用一定量的緩沖液沖洗多層瓶三次,將沖洗液同時置于 離心管中,混勻計數或者傳代接種。 

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