一、    無(wú)菌操作要求 

食品微生物實(shí)驗(yàn)室工作人員，必須有嚴(yán)格的無(wú)菌觀念，許多試驗(yàn)要求在無(wú)菌條件下進(jìn)行，主要原因：一是防止試驗(yàn)操作中人為污染樣品，二是保證工作人員安全，防止檢出的致病菌由于操作不當(dāng)造成個(gè)人污染。

1. 接種細(xì)菌時(shí)必須穿工作服、戴工作帽。 

2. 進(jìn)行接種食品樣品時(shí)，必須穿專用的工作服、帽及拖鞋，應(yīng)放在無(wú)菌室緩沖間，工作前經(jīng)紫外線消毒后使用。 

3. 接種食品樣品時(shí)，應(yīng)在進(jìn)無(wú)菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球?qū)⑹植粮蓛簟?nbsp;

4. 進(jìn)行接種所用的吸管，平皿及培養(yǎng)基等必須經(jīng)消毒滅菌，打開(kāi)包裝未使用完的器皿，不能放置后再使用，金屬用具應(yīng)高壓滅菌或用95%酒精點(diǎn)燃燒灼三次后使用。 

5. 從包裝中取出吸管時(shí)，吸管尖部不能觸及外露部位，使用吸管接種于試管或平皿時(shí)，吸管尖不得觸及試管或平皿邊。 

6. 接種樣品、轉(zhuǎn)種細(xì)菌必須在酒精燈前操作，接種細(xì)菌或樣品時(shí)，吸管從包裝中取出后及打開(kāi)試管塞都要通過(guò)火焰消毒。

7. 接種環(huán)和針在接種細(xì)菌前應(yīng)經(jīng)火焰燒灼全部金屬絲，必要時(shí)還要燒到環(huán)和針與桿的連接處，接種結(jié)核菌和烈性菌的接種環(huán)應(yīng)在沸水中煮沸5min，再經(jīng)火焰燒灼。 

8. 吸管吸取菌液或樣品時(shí)，應(yīng)用相應(yīng)的橡皮頭吸取，不得直接用口吸。 

二、無(wú)菌間使用要求 

1. 無(wú)菌間通向外面的窗戶應(yīng)為雙層玻璃，并要密封，不得隨意打開(kāi)，并設(shè)有與無(wú)菌間大小相應(yīng)的緩沖間及推拉門，另設(shè)有0.5-0.7平米的小窗，以備進(jìn)入無(wú)菌間后傳遞物品。 

2. 無(wú)菌間內(nèi)應(yīng)保持清潔，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作臺(tái)面，不得存放與實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)的物品。 

3. 無(wú)菌間使用前后應(yīng)將門關(guān)緊，打開(kāi)紫外燈，如采用室內(nèi)懸吊紫外燈消毒時(shí)，需30W紫外燈，距離在1.0m處，照射時(shí)間不少于30min，使用紫外燈，應(yīng)注意不得直接在紫外線下操作，以免引起損傷，燈管每隔兩周需用酒精棉球輕輕擦拭，除去上面灰塵和油垢，以減少紫外線穿透的影響。 

4. 處理和接種食品標(biāo)本時(shí)，進(jìn)入無(wú)菌間操作，不得隨意出入，如需要傳遞物品，可通過(guò)無(wú)菌傳遞窗傳遞。 

5. 在無(wú)菌間內(nèi)如需要安裝空調(diào)時(shí)，則應(yīng)有過(guò)濾裝置。 

三、消毒滅菌要求 

    微生物檢測(cè)用的玻璃器皿、金屬用具及培養(yǎng)基、被污染和接種的培養(yǎng)物等，必須經(jīng)滅菌后方能使用。 

   （一）干熱和濕熱高壓蒸氣鍋滅菌方法 

1．滅菌前準(zhǔn)備 

（1）所有需要滅菌的物品首先應(yīng)清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用紙包裝嚴(yán)密，如用金屬筒應(yīng)將上面通氣孔打開(kāi)。 

（2）裝培養(yǎng)基的三角瓶塞，用紙包好，試管蓋好蓋，注射器須將管芯抽出，用紗布包好。 

2．裝放 

（1）干熱滅菌器：裝放物品不可過(guò)擠，且不能接觸箱的四壁。 

（2）大型高壓蒸氣鍋：放置滅菌物品分別包扎好，直接放入消毒筒內(nèi)，物品之間不能過(guò)擠。 

3．設(shè)備檢查 

（1）檢查門的開(kāi)關(guān)是否靈活，橡皮圈有無(wú)損壞，是否平整。 

（2）壓力表蒸氣排盡時(shí)是否停留在零位，關(guān)好門和蓋，通蒸氣或加熱后，觀察是否漏氣，壓力表與溫度計(jì)所標(biāo)示的狀況是否吻合，管道有無(wú)堵塞。 

（3）對(duì)有自動(dòng)電子程序控制裝置的滅菌器，使用前應(yīng)檢查規(guī)定的程序，是否符合于進(jìn)行滅菌處理的要求。 

4．滅菌處理 

(1) 干熱滅菌法：此法適應(yīng)于在干熱情況下，不損壞、不變質(zhì)、不蒸發(fā)的物品、較常用于玻璃器皿、金屬制品、陶瓷制品等的滅菌。 

a. 器械器皿應(yīng)清洗后再干烤，以防附著在表面的污物炭化。 

b. 滅菌時(shí)安放物品不能過(guò)擠，不要直接接觸底和箱壁，物品之間留有空隙。 

c.滅菌時(shí)將箱門關(guān)緊，接上電源，先將排氣孔打開(kāi)約30min，排除滅菌器中的冷空氣，溫度升至160℃調(diào)節(jié)指示燈，維持1.5 –2h。 

d.滅菌完畢后或溫度升溫過(guò)程中，須在60℃以下才能打開(kāi)箱門。 

(2) 手提式高壓鍋或立式壓力蒸氣滅菌器的使用應(yīng)按下列步驟進(jìn)行： 

a. 手提式高壓鍋在主體內(nèi)加入3L清水，立式高壓鍋加水16L（重復(fù)使用時(shí)應(yīng)將水量補(bǔ)足，水變混濁需更換）。 

b. 手提式壓力鍋將頂蓋上的排氣管插入消毒桶內(nèi)壁的方管中（無(wú)軟管或軟管銹蝕破裂的滅菌器不得使用）。 

c. 蓋好頂蓋擰緊，勿使漏氣；置滅菌器于火源上加熱，立式壓力鍋通上電源，并打開(kāi)頂蓋上的排氣閥放了冷氣（水沸騰后排氣10-15min）。 

d. 關(guān)閉排氣閥，使蒸氣壓上升到規(guī)定要求，并維持規(guī)定時(shí)間（按滅菌物品性質(zhì)與有關(guān)情況而定）。 

e. 達(dá)到規(guī)定時(shí)間后，對(duì)需干燥的物品，立即打開(kāi)排氣閥排出蒸氣，待壓力恢復(fù)到零時(shí)，自然冷卻至60℃后開(kāi)蓋取物，如為液體物品，不要打開(kāi)排氣閥，而應(yīng)立即將鍋去除熱源，待自然冷卻，壓力恢復(fù)至零，溫度降到60℃以下再開(kāi)蓋取物，以防突然減壓液體劇烈沸騰或容器爆破。 

(3) 臥式壓力鍋蒸氣滅菌器的使用按下列步驟進(jìn)行： 

a. 關(guān)緊鍋門，打開(kāi)進(jìn)氣閥，將蒸氣引入夾層進(jìn)行預(yù)熱，夾層內(nèi)冷空氣經(jīng)阻氣器自動(dòng)排出。 

b. 夾層達(dá)到預(yù)定溫度后，打開(kāi)鍋室進(jìn)氣閥，將蒸氣引入鍋室，鍋室內(nèi)冷空氣經(jīng)鍋室阻氣器自動(dòng)排出。 

c. 待鍋室達(dá)到規(guī)定的壓力與溫度時(shí)，調(diào)節(jié)進(jìn)氣閥，使保持恒定至

d. 自然或人工降溫至60℃再開(kāi)門取物，不得使用快速排出蒸氣法，以防突然降壓，液體劇烈沸騰或容器爆破。 

e.使用自動(dòng)程序控制式壓力蒸氣滅菌器，在放好物品關(guān)緊門后，應(yīng)根據(jù)物品類別按動(dòng)相應(yīng)開(kāi)關(guān)，以便按要求程序自動(dòng)進(jìn)行滅菌，滅菌時(shí)必須利用附設(shè)儀表記錄溫度與時(shí)間以備查，操作要求應(yīng)嚴(yán)格按照廠家說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。 

3. 煮沸消毒：可用煮鍋或煮沸消毒器，水沸騰后再煮5～15 min，也可在水中加入2﹪石炭酸煮沸5 min，加入0.02﹪甲醛,80℃煮60 min均可達(dá)到滅菌目的,但選用煮沸消毒的增消劑時(shí)，應(yīng)注意對(duì)物品的腐蝕性。

4. 滅菌處理：滅菌后物品,按正常情況已屬無(wú)菌，從滅菌器中取出應(yīng)仔細(xì)檢查放置，以免再度污染。

(1) 物品取出，隨即檢查包裝的完整性，若有破壞或棉塞脫掉，不可作為無(wú)菌物品使用。

(2) 取出的物品，如為包裝有明顯的水浸者，不可作為無(wú)菌物品使用。

(3) 培養(yǎng)基或試劑等，應(yīng)檢查是否符合達(dá)到滅菌后的色澤或狀態(tài)，未達(dá)到者應(yīng)廢棄。

(4) 啟閉式容器，在取出時(shí)應(yīng)將篩孔關(guān)閉。

(5) 取出的物品掉落在地或誤放不潔這處，或沾有水液，均視為受到污染，不可作為無(wú)菌物品使用。

(6) 取出的合格滅菌物品，應(yīng)存放于貯藏室或防塵柜內(nèi)，嚴(yán)禁與未滅菌物品混放。

(7) 凡屬合格物品,應(yīng)標(biāo)有滅菌日期及有效期限.

(8) 每批滅菌處理完成后,記錄滅菌品名、數(shù)量、溫度、時(shí)間、操作者。

四、有毒有菌污物處理要求

微生物實(shí)驗(yàn)所用實(shí)驗(yàn)器材、培養(yǎng)物等未經(jīng)消毒處理，一律不得帶出實(shí)驗(yàn)室。

1. 經(jīng)培養(yǎng)的污染材料及廢棄物應(yīng)放在嚴(yán)密的容器或鐵絲筐內(nèi)，并隼中存放在指定地點(diǎn)，待統(tǒng)一進(jìn)行高壓滅菌。

2. 經(jīng)微生物污染的培養(yǎng)物，必須經(jīng)121℃30 min高壓滅菌。

3. 染菌后的吸管，使用后放入5﹪煤酚皂溶液或石炭酸液中，少浸泡24h（消毒液體不得低于浸泡的高度）再經(jīng)121℃30 min高壓滅菌。

4.涂片染色沖洗片的液體，一般可直接沖入下水道，烈性菌的沖洗液必須沖在燒杯中，經(jīng)高壓滅菌后方可倒入下水道，染色的玻片放入5﹪煤酚皂溶液中浸泡24 h后，煮沸洗滌。做凝隼試驗(yàn)用的玻片或平皿，必須高壓滅菌后洗滌。

5.打碎的培養(yǎng)物，立即用5﹪煤酚皂溶液或石炭酸液噴灑和浸泡被污染部位，浸泡半小時(shí)后再擦拭干凈。

6.污染的工作服或進(jìn)行烈性試驗(yàn)所穿的工作服、帽、口罩等，應(yīng)放入專用消毒袋內(nèi)，經(jīng)高壓滅菌后方能洗滌。

五、培養(yǎng)基制備要求

培養(yǎng)基制備的質(zhì)量將直接影響微生物生長(zhǎng)。因?yàn)楦鞣N微生物對(duì)其營(yíng)養(yǎng)要求不完全相同，培養(yǎng)目的的不同，各種培養(yǎng)基制備要求如下：

1. 根據(jù)培養(yǎng)基配方的成分按量稱取，然后溶于蒸餾水中，在使用前對(duì)應(yīng)用的試劑藥品應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)。

2. PH測(cè)定及調(diào)節(jié)：PH測(cè)定要在培養(yǎng)基冷至室溫時(shí)進(jìn)行，因在熱或冷的情況下，其PH有一定差異，當(dāng)測(cè)定好時(shí)，按計(jì)算量加入堿或酸混勻后，應(yīng)再測(cè)試一次。培養(yǎng)基PH值一定要準(zhǔn)確，否則會(huì)影響微生物的生長(zhǎng)或影響結(jié)果的觀察。但需注意因高壓滅菌可影響一些培養(yǎng)基的PH降低或升高，故不宜滅菌壓力過(guò)高或次數(shù)太多，以免影響培養(yǎng)基的質(zhì)量，指示劑、去氧膽酸鈉、瓊脂等一般在調(diào)完P(guān)H后再加入。

3. 培養(yǎng)基需保持澄清，便于觀察細(xì)菌的生長(zhǎng)情況，培養(yǎng)基加熱煮沸后，可用脫脂棉花或絨布過(guò)濾，以除去沉淀物，必要時(shí)可用雞蛋白澄清處理，所用瓊脂條要預(yù)先洗凈涼干后使用，避免因瓊脂含雜質(zhì)而影響透明度。

4. 盛裝培養(yǎng)基不宜用鐵、銅等容器，使用洗凈的中性硬質(zhì)玻璃容器為好。

5. 培養(yǎng)基的滅菌既要達(dá)到完全滅菌目的，又要注意不因加熱而降低其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，一般121℃15min即可，如為含有不耐高熱物質(zhì)的培養(yǎng)基如糖類、血清、明膠等，則應(yīng)采用低溫滅菌或間歇法滅菌，一些不能加熱的試劑如亞碲酸鉀、卵黃、TTC、抗菌素等，待基礎(chǔ)瓊脂高壓滅菌后涼至50℃左右再加入。

6. 每批培養(yǎng)基制備好后，應(yīng)做無(wú)菌生長(zhǎng)試驗(yàn)及所檢菌株生長(zhǎng)試驗(yàn)。如果是生化培養(yǎng)基，使用標(biāo)準(zhǔn)菌株接種培養(yǎng)，觀察生化反應(yīng)結(jié)果，應(yīng)呈正常反應(yīng)，培養(yǎng)基不應(yīng)貯存過(guò)久，必要時(shí)可置4℃冰箱存放。

7. 目前各種干燥培養(yǎng)基較多，每批需用標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行生長(zhǎng)試驗(yàn)或生化反應(yīng)觀察，各種培養(yǎng)基用相應(yīng)菌株生長(zhǎng)試驗(yàn)良好后方可應(yīng)用，新購(gòu)進(jìn)的或存放過(guò)久的干燥培養(yǎng)基，在配制時(shí)也應(yīng)測(cè)PH，使用時(shí)需根據(jù)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)用量和方法進(jìn)行。

8. 每批制備的培養(yǎng)基所用化學(xué)試劑、滅菌情況及菌株生長(zhǎng)試驗(yàn)結(jié)果、制作人員等應(yīng)做好記錄，以備查詢。

六、樣品采集及處理要求

1. 所采集的檢驗(yàn)樣品一定要具有代表性，采樣時(shí)應(yīng)首先對(duì)該批食品原料、加工、運(yùn)輸、貯藏方法條件、周圍環(huán)境衛(wèi)生狀況等進(jìn)行詳細(xì)調(diào)查，檢查是否有污染源存在。

2. 根據(jù)食品的種類及數(shù)量，采樣數(shù)量及方法應(yīng)按標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法的要求進(jìn)行。

3. 采樣應(yīng)注意無(wú)菌操作，容器必須滅菌，避免環(huán)境中微生物污染，容器不得使用煤酚皂溶液，用新潔爾滅、酒精等消物滅菌，更不能含有此類消毒或抗生素類藥物，以避免殺死樣品中的微生物，所用剪、刀、匙用具也需滅菌方可應(yīng)用。

4. 樣品采集后應(yīng)立即送往檢驗(yàn)室進(jìn)行檢驗(yàn)，送檢過(guò)程中一般不超過(guò)3h，如路程較遠(yuǎn)，可保存在1～5℃環(huán)境中，如需冷凍者，則在凍存狀態(tài)下送檢。

5. 檢驗(yàn)室收到樣品后，進(jìn)行登記（樣品名稱、送檢單位、數(shù)量、日期、編號(hào)等），觀察樣品的外觀，如果發(fā)現(xiàn)有下列情況之一者，可拒絕檢驗(yàn)。

(1) 樣品經(jīng)過(guò)特殊高壓、煮沸或其他方法殺菌者，失去代表原食品檢驗(yàn)意義者。

(2) 瓶、袋裝食品已啟開(kāi)者，熟肉及其制品、熟禽等食品已折碎不完整者，即失去原食品形狀者（食物中毒樣品除外）。

(3) 按規(guī)定采樣數(shù)量不足者。對(duì)送檢符合要求的樣品，檢驗(yàn)室收到后，應(yīng)立即進(jìn)行檢驗(yàn)，如果條件不具備，應(yīng)置4℃冰箱存放，及時(shí)準(zhǔn)備創(chuàng)造條件，然后進(jìn)行檢驗(yàn)。

6. 樣品檢驗(yàn)時(shí)，根據(jù)其不同性狀，進(jìn)行適當(dāng)處理。

(1) 液體樣品接種時(shí)，應(yīng)充分混合均勻，按量吸取進(jìn)行接種。

(2) 固體樣品，用滅菌刀、剪取其不同部位共25g，置于225ml滅菌生理鹽水或其他溶液中，用均質(zhì)器攪碎混勻后，按量吸取接種。

(3) 瓶、袋裝食品應(yīng)用滅菌操作啟開(kāi)，根據(jù)性狀選擇上述方法處理后接種。

七、樣品檢驗(yàn)、記錄和報(bào)告的要求

1. 檢驗(yàn)室收到樣品后，首先進(jìn)行外觀檢驗(yàn)，及時(shí)按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法進(jìn)行檢驗(yàn)，檢驗(yàn)過(guò)程中要認(rèn)真、負(fù)責(zé)、嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作，避免環(huán)境中微生物污染。

2.樣品檢驗(yàn)過(guò)程中所用方法、出現(xiàn)的現(xiàn)象和結(jié)果等均要用文字寫(xiě)出試驗(yàn)紀(jì)錄，以作為對(duì)結(jié)果分析、判定的依據(jù)，記錄要求詳細(xì)、清楚、真實(shí)、客觀、不得涂改和偽造。

微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)施與設(shè)備驗(yàn)證

毫無(wú)疑問(wèn)，微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)施與設(shè)備是開(kāi)展微生物檢測(cè)的物質(zhì)基礎(chǔ)和保證。因此開(kāi)展微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，離不開(kāi)實(shí)驗(yàn)室設(shè)施與設(shè)備。但光有實(shí)驗(yàn)室設(shè)施與設(shè)備，而沒(méi)有對(duì)實(shí)驗(yàn)室設(shè)施與設(shè)備的性能進(jìn)行檢測(cè)的驗(yàn)證，同樣起不到保證作用。微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)施與設(shè)備主要包括有：①保證檢測(cè)的無(wú)菌環(huán)境設(shè)施與器械———如潔凈室（無(wú)菌室）、無(wú)菌隔離系統(tǒng)、凈化工作臺(tái)等；②保證檢測(cè)用實(shí)驗(yàn)用品與用具的無(wú)菌（滅菌）設(shè)施或設(shè)備———如高壓蒸汽滅菌器（或手提高壓蒸汽滅菌鍋）、電熱恒溫干燥箱等；③保證檢測(cè)細(xì)菌內(nèi)毒素反應(yīng)的器械用具———如各種細(xì)菌內(nèi)毒素反應(yīng)測(cè)定儀；④保證檢測(cè)中微生物能恒溫生長(zhǎng)與菌種保存的恒溫設(shè)備———如恒溫培養(yǎng)箱、冰箱；⑤各種實(shí)驗(yàn)操作所用儀器———全封閉薄膜過(guò)濾裝置、電動(dòng)勻漿儀、電熱恒溫水浴箱、離心機(jī)、天平、顯微鏡等；⑥實(shí)驗(yàn)操作所用的玻璃器具———各種刻度吸管、移液管、容量瓶、試管、三角燒瓶、雙碟培養(yǎng)皿等常用玻璃器具；⑦保證測(cè)量各類樣品中微生物菌落數(shù)或抑菌直徑的有關(guān)測(cè)量?jī)x———如空氣浮游菌采樣器、空氣懸浮粒子計(jì)數(shù)器、ZY-300IV多功能微生物自動(dòng)測(cè)量分析儀等。 
    以上微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)施與設(shè)備如何做好管理與驗(yàn)證，確保質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，在總體管理上，要建立實(shí)驗(yàn)室的設(shè)施與設(shè)備明細(xì)目錄，包括名稱、型號(hào)、廠商（家）、購(gòu)置時(shí)間、驗(yàn)收、調(diào)試或校驗(yàn)、儀器保管負(fù)責(zé)人、使用操作規(guī)范、使用或維修記錄、后到報(bào)廢等一系列的儀器設(shè)備質(zhì)量保證檔案。   
   

微生物實(shí)驗(yàn)室建設(shè)

微生物實(shí)驗(yàn)室建設(shè)

一 、微生物實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)

    微生物實(shí)驗(yàn)室由準(zhǔn)備室、洗滌室、滅菌室、無(wú)菌室、恒溫培養(yǎng)室和普通實(shí)驗(yàn)室六部分組成。這些房間的共同特點(diǎn)是地板和墻壁的質(zhì)地光滑堅(jiān)硬，儀器和設(shè)備的陳設(shè)簡(jiǎn)潔，便于打掃衛(wèi)生。

二、微生物實(shí)驗(yàn)室基本要求

（一）準(zhǔn)備室

    準(zhǔn)備室用于配制培養(yǎng)基和樣品處理等。室內(nèi)設(shè)有試劑柜、存放器具或材料的專柜、實(shí)驗(yàn)臺(tái)、電爐、冰箱和上下水道、電源等。

（二）洗滌室

    洗滌室用于洗刷器皿等。由于使用過(guò)的器皿已被微生物污染，有時(shí)還會(huì)存在病原微生物。因此，在條件允許的情況下，設(shè)置洗滌室。室內(nèi)應(yīng)備有加熱器、蒸鍋，洗刷器皿用的盆、桶等，還應(yīng)有各種瓶刷、去污粉、肥皂、洗衣粉等。

（三）滅菌室

    滅菌室主要用于培養(yǎng)基的滅菌和各種器具的滅菌，室內(nèi)應(yīng)備有高壓蒸汽滅菌器、烘箱等滅菌設(shè)備及設(shè)施。

（四）無(wú)菌室

    無(wú)菌室也稱接種室，是系統(tǒng)接種、純化菌種等無(wú)菌操作的專用實(shí)驗(yàn)室。在微生物工作中，菌種的接種移植是一項(xiàng)主要操作，這項(xiàng)操作的特點(diǎn)就是要保證菌種純種，防止雜菌的污染。在一般環(huán)境的空氣中，由于存在許多塵埃和雜菌，很易造成污染，對(duì)接種工作干擾很大。

1. 無(wú)菌室的設(shè)置

    無(wú)菌室應(yīng)根據(jù)既經(jīng)濟(jì)又科學(xué)的原則來(lái)設(shè)置。其基本要求有以下幾點(diǎn)：

　　（1）無(wú)菌室應(yīng)有內(nèi)、外兩間，內(nèi)間是無(wú)菌室，外間是緩沖室。房間容積不宜過(guò)大，以便于空氣滅菌。內(nèi)間面積2×2.5＝5m2，外間面積1×2＝2m2，高以2.5m以下為宜，都應(yīng)有天花板。

　　（2）內(nèi)間應(yīng)當(dāng)設(shè)拉門，以減少空氣的波動(dòng)，門應(yīng)設(shè)在離工作臺(tái)遠(yuǎn)的位置上；外間的門也用拉門，要設(shè)在距內(nèi)間遠(yuǎn)的位置上。

（3）在分隔內(nèi)間與外間的墻壁或“隔扇”上，應(yīng)開(kāi)一個(gè)小窗，作接種過(guò)程中必要的內(nèi)外傳遞物品的通道，以減少人員進(jìn)出內(nèi)間的次數(shù)，降低污染程度。小窗寬60cm、高40cm、厚30cm，內(nèi)外都掛對(duì)拉的窗扇。

　　（4）無(wú)菌室容積小而嚴(yán)密，使用一段時(shí)間后，室內(nèi)溫度很高，故應(yīng)設(shè)置通氣窗。通氣窗應(yīng)設(shè)在內(nèi)室進(jìn)門處的頂棚上（即離工作臺(tái)遠(yuǎn)的位置），為雙層結(jié)構(gòu)，外層為百葉窗，內(nèi)層可用抽板式窗扇。通氣窗可在內(nèi)室使用后、滅菌前開(kāi)啟，以流通空氣。有條件可安裝恒溫恒濕機(jī)。

　2. 無(wú)菌室內(nèi)設(shè)備和用具

　　（1）無(wú)菌室內(nèi)的工作臺(tái)，不論是什么材質(zhì)、用途的，都要求表面光滑和臺(tái)面水平。

　　（2）在內(nèi)室和外室各安裝一個(gè)紫外燈（多為30W）。內(nèi)室的紫外線燈應(yīng)安裝在經(jīng)常工作的座位正上方，離地面2m，外室的紫外線燈可安裝在外室中央。

　　（3）外室應(yīng)有專用的工作服、鞋、帽、口罩、盛有來(lái)蘇兒水的瓷盆和毛巾、手持噴霧器和5%石炭酸溶液等。

　　（4）內(nèi)室應(yīng)有酒精燈、常用接種工具、不銹鋼制的刀、剪、鑷子、70%的酒精棉球、工業(yè)酒精、載玻璃片、特種蠟筆、記錄本、鉛筆、標(biāo)簽紙、膠水、廢物筐等。

3. 無(wú)菌室的滅菌消毒

　　（1）薰蒸：這是無(wú)菌室徹底滅菌的措施。無(wú)菌室使用了較長(zhǎng)時(shí)間，污染比較嚴(yán)重時(shí)，應(yīng)進(jìn)行薰蒸滅菌。可用甲醛、乳酸或薰蒸。

　　（2）噴霧：在每次使用無(wú)菌室前進(jìn)行。噴霧可促使空氣中微粒及微生物沉降，防止桌面、地面上的微塵飛場(chǎng)，并有殺菌作用。可用5%石炭酸噴霧。

　　（3）紫外線照射：在每次使用無(wú)菌室前進(jìn)行。紫外線有較好的殺菌效果。通常應(yīng)開(kāi)啟紫外線燈照射30～60min。

4. 無(wú)菌室工作規(guī)程

　　（1）無(wú)菌室滅菌。每次使用前開(kāi)啟紫外線燈照射30min以上，或在使用前30min，對(duì)內(nèi)外室用5%石炭酸噴霧。

　　（2）用肥皂洗手后，把所需器材搬入外室；在外室換上已滅菌的工作服、工作帽和工作鞋，戴好口罩，然后用2%煤酚皂液將手浸洗2分鐘。

　　（3）將各種需用物品搬進(jìn)內(nèi)室清點(diǎn)、就位，用5%石炭酸在工作臺(tái)面上方和操作員站位空間噴霧，返回外室，5～10min后再進(jìn)內(nèi)室工作。

（4）接種操作前，用70%酒精棉球擦手；進(jìn)行無(wú)菌操作時(shí)，動(dòng)作要輕緩，盡量減少空氣波動(dòng)和地面揚(yáng)塵。

　　（5）工作中應(yīng)注意安全。如遇棉塞著火，用手緊握或用濕布包裹熄滅，切勿用嘴吹，以免擴(kuò)大燃燒；如遇有菌培養(yǎng)物灑落或打碎有菌容器時(shí)，應(yīng)用浸潤(rùn)5%石炭酸的抹布包裹后，并用浸潤(rùn)5%石炭酸的抹布擦拭臺(tái)面或地面，用酒精棉球擦手后再繼續(xù)操作。

　　（6）工作結(jié)束，立即將臺(tái)面收拾干凈，將不應(yīng)在無(wú)菌室存放的物品和廢棄物全部拿出無(wú)菌室后，對(duì)無(wú)菌室用5%石炭酸噴霧，或開(kāi)紫外線燈照射30min。

（五）恒溫培養(yǎng)室

1. 培養(yǎng)室的設(shè)置

　　（1）培養(yǎng)室應(yīng)有內(nèi)、外兩間，內(nèi)室是培養(yǎng)室，外室是緩沖室。房間容積不宜大，以利于空氣滅菌，內(nèi)室面積在3.2×4.4＝14m2左右，外室面積在3.2×1.8＝6m2左右，高以2.5m左右為宜，都應(yīng)有天花板。

　　（2）分隔內(nèi)室與外室的墻壁上部應(yīng)設(shè)帶空氣過(guò)濾裝置的通風(fēng)口。

　　（3）為滿足微生物對(duì)溫度的需要，需安裝恒溫恒濕機(jī)。

　　（4）內(nèi)外室都應(yīng)在室中央安裝紫外線燈，以供滅菌用。

2. 培養(yǎng)室內(nèi)設(shè)備及用具

　　（1）內(nèi)室通常配備培養(yǎng)架和搖瓶機(jī)（搖床）。常用的搖瓶機(jī)有旋轉(zhuǎn)式、往復(fù)式兩種。

　　（2）外室應(yīng)有專用的工作服、鞋、帽、口罩、手持噴霧器和5%石炭酸溶液、70%酒精棉球等。

3. 培養(yǎng)室的滅菌、消毒

    同無(wú)菌室的滅菌、消毒措施。

    小規(guī)模的培養(yǎng)可不啟用恒溫培養(yǎng)室，而在恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行。

（六）普通實(shí)驗(yàn)室

    進(jìn)行微生物的觀察、計(jì)數(shù)和生理生化測(cè)定工作的場(chǎng)所。室內(nèi)的陳設(shè)因工作側(cè)重點(diǎn)不同而有很大的差異。一般均配備實(shí)驗(yàn)臺(tái)、顯微鏡、柜子及凳子。實(shí)驗(yàn)臺(tái)要求平整、光滑，實(shí)驗(yàn)柜要足以容納日常使用的用具及藥品等。

（七）實(shí)驗(yàn)室其他要求

    水、電、氣等的容量、布設(shè)、性能均應(yīng)滿足實(shí)驗(yàn)室工作的需要。